Mèsi paske ou te vizite Nature.com. Vèsyon navigatè w ap itilize a gen yon sipò CSS limite. Pou pi bon rezilta, nou rekòmande pou w itilize yon navigatè ki pi resan (oswa dezaktive mòd konpatibilite nan Internet Explorer). Antretan, pou asire sipò kontinyèl, nou pral montre sit la san estil ak JavaScript.
Etablisman modèl bèt pou chanjman modik (MC) se yon baz enpòtan pou etidye MC. Senkant-kat lapen blan Nouvèl Zelann yo te divize an gwoup operasyon simulasyon, gwoup enplantasyon misk (gwoup ME) ak gwoup enplantasyon nwayo pulposus (gwoup NPE). Nan gwoup NPE a, yo te ekspoze disk entèvètebral la pa yon apwòch chirijikal lonbè anterolateral epi yo te itilize yon zegwi pou pike kò vètebral L5 la toupre plak final la. Yo te ekstrè NP nan disk entèvètebral L1/2 a ak yon sereng epi yo te enjekte li ladan l. Yo te fè yon twou nan zo soukondral la. Pwosedi chirijikal yo ak metòd perçage nan gwoup enplantasyon misk la ak gwoup operasyon simulasyon an te menm ak sa yo ki te nan gwoup enplantasyon NP a. Nan gwoup ME a, yo te mete yon moso misk nan twou a, alòske nan gwoup operasyon simulasyon an, yo pa t mete anyen nan twou a. Apre operasyon an, yo te fè eskanè IRM ak tès byolojik molekilè. Siyal la nan gwoup NPE a te chanje, men pa te gen okenn chanjman siyal evidan nan gwoup operasyon simulasyon an ak gwoup ME a. Obsèvasyon istolojik la te montre ke yo te obsève yon pwoliferasyon tisi anòmal nan sit enplantasyon an, epi ekspresyon IL-4, IL-17 ak IFN-γ te ogmante nan gwoup NPE a. Enplantasyon NP nan zo subkondral la ka fòme yon modèl animal pou MC.
Chanjman modik (MC) se lezyon nan plak tèminal vètebral yo ak mwèl zo adjasan an ki vizib sou imaj pa rezonans mayetik (IRM). Yo byen komen nan moun ki gen sentòm ki asosye avèk yo1. Anpil etid mete aksan sou enpòtans MC akòz asosyasyon li ak doulè nan do ba (DBL)2,3. de Roos et al.4 ak Modic et al.5 te dekri pou premye fwa, poukont yo, twa diferan kalite anomali siyal subkondral nan mwèl zo vètebral la. Chanjman modik tip I yo ipoentans sou sekans pondere T1 (T1W) ak ipèentans sou sekans pondere T2 (T2W). Lezyon sa a revele plak tèminal fisur ak tisi granilasyon vaskilè adjasan nan mwèl zo a. Chanjman modik tip II yo montre yon siyal wo sou tou de sekans T1W ak T2W. Nan kalite lezyon sa a, yo ka jwenn destriksyon plak tèminal yo, osi byen ke ranplasman gra istolojik nan mwèl zo adjasan an. Chanjman modik tip III yo montre yon siyal ba nan sekans T1W ak T2W. Yo te obsève lezyon sklerotik ki koresponn ak plak tèminal yo6. Yo konsidere MC kòm yon maladi patolojik nan kolòn vètebral la epi li gen yon lyen sere avèk anpil maladi dejeneratif nan kolòn vètebral la7,8,9.
Lè nou konsidere done ki disponib yo, plizyè etid te bay enfòmasyon detaye sou etioloji ak mekanis patolojik MC yo. Albert et al. te sigjere ke MC ka koze pa èrni disk8. Hu et al. te atribiye MC a dejenerasyon grav disk10. Kroc te pwopoze konsèp "rupture disk entèn," ki deklare ke chòk disk repetitif ka mennen nan mikwochire nan plak final la. Apre fòmasyon fann, destriksyon plak final la pa nwayo pulposus (NP) la ka deklanche yon repons otoiminitè, ki plis mennen nan devlopman MC11. Ma et al. te pataje yon opinyon menm jan an epi yo te rapòte ke otoiminite pwovoke pa NP jwe yon wòl kle nan patogenez MC12.
Selil sistèm iminitè yo, sitou lenfosit CD4+ T helper yo, jwe yon wòl enpòtan nan patogenez otoiminite a13. Sou-gwoup Th17 ki fèk dekouvri a pwodui sitokin proenflamatwa IL-17 la, li ankouraje ekspresyon chemokine, epi li stimul selil T nan ògàn ki domaje yo pou pwodui IFN-γ14. Selil Th2 yo jwe tou yon wòl inik nan patogenez repons iminitè yo. Ekspresyon IL-4 kòm yon selil Th2 reprezantatif ka mennen nan konsekans imunopatolojik grav15.
Malgre anpil etid klinik te fèt sou MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, toujou pa gen ase modèl eksperimantal sou bèt ki ka imite pwosesis MC a ki rive souvan lakay moun epi ki ka itilize pou envestige etiyoloji a oswa nouvo tretman tankou terapi sib. Jiska prezan, se sèlman kèk modèl bèt MC ki te rapòte pou etidye mekanis patolojik ki kache yo.
Baze sou teyori otoiminitè Albert ak Ma te pwopoze a, etid sa a te etabli yon modèl MC lapen ki senp epi ki ka repwodui lè yo te oto-transplante NP toupre plak vètebral ki te fouye a. Lòt objektif yo se obsève karakteristik istolojik modèl bèt yo epi evalye mekanis espesifik NP nan devlopman MC. Pou sa, nou itilize teknik tankou byoloji molekilè, IRM, ak etid istolojik pou etidye pwogresyon MC.
De lapen te mouri akòz senyen pandan operasyon an, epi kat lapen te mouri pandan anestezi a pandan IRM. 48 lapen ki rete yo te siviv epi yo pa t montre okenn siy konpòtman oswa newolojik apre operasyon an.
IRM montre ke entansite siyal tisi entegre a nan diferan twou yo diferan. Entansite siyal kò vètebral L5 nan gwoup NPE a chanje piti piti nan 12, 16 ak 20 semèn apre ensèsyon an (sekans T1W te montre yon siyal ki ba, epi sekans T2W te montre yon siyal melanje plis yon siyal ki ba) (Fig. 1C), pandan ke aparans IRM de lòt gwoup pati entegre yo te rete relativman estab pandan menm peryòd la (Fig. 1A, B).
(A) Imaj IRM sekansyèl reprezantatif kolòn vètebral lonbè lapen an nan 3 pwen tan. Pa gen okenn anomali siyal ki te jwenn nan imaj gwoup operasyon simulasyon an. (B) Karakteristik siyal kò vètebral la nan gwoup ME a sanble ak sa yo ki nan gwoup operasyon simulasyon an, epi pa gen okenn chanjman siyifikatif ki obsève nan sit entegrasyon an sou tan. (C) Nan gwoup NPE a, siyal fèb la vizib klèman nan sekans T1W a, epi siyal melanje a ak siyal fèb la vizib klèman nan sekans T2W a. Soti nan peryòd 12 semèn nan rive nan peryòd 20 semèn nan, siyal wo sporadik ki antoure siyal fèb yo nan sekans T2W a diminye.
Yo ka wè yon ipèplazi zo evidan nan sit enplantasyon kò vètebral la nan gwoup NPE a, epi ipèplazi zo a rive pi vit soti nan 12 a 20 semèn (Fig. 2C) konpare ak gwoup NPE a, pa gen okenn chanjman siyifikatif ki obsève nan kò vètebral modle yo; gwoup Sham ak gwoup ME (Fig. 2C) 2A,B).
(A) Sifas kò vètebral la nan pòsyon ki enplante a trè lis, twou a geri byen, epi pa gen okenn ipèplazi nan kò vètebral la. (B) Fòm sit enplante a nan gwoup ME a sanble ak sa ki nan gwoup operasyon simulation an, epi pa gen okenn chanjman evidan nan aparans sit enplante a sou tan. (C) Ipèplazi zo a te fèt nan sit enplante a nan gwoup NPE a. Ipèplazi zo a te ogmante rapidman e menm pwolonje atravè disk entèvèrtebral la rive nan kò vètebral kontralateral la.
Analiz istolojik bay plis enfòmasyon detaye sou fòmasyon zo a. Figi 3 montre foto seksyon postoperatwa yo ki te kolore ak H&E. Nan gwoup operasyon simulasyon an, kondrosit yo te byen ranje e pa gen okenn pwoliferasyon selil ki te detekte (Fig. 3A). Sitiyasyon an nan gwoup ME a te sanble ak sa ki nan gwoup operasyon simulasyon an (Fig. 3B). Sepandan, nan gwoup NPE a, yo te obsève yon gwo kantite kondrosit ak pwoliferasyon selil ki sanble ak NP nan sit enplantasyon an (Fig. 3C);
(A) Ou ka wè trabekil toupre plak final la, kondrosit yo byen ranje ak gwosè ak fòm selil inifòm epi pa gen pwoliferasyon (40 fwa). (B) Kondisyon sit enplantasyon an nan gwoup ME a sanble ak sa ki nan gwoup fo a. Ou ka wè trabekil ak kondrosit, men pa gen okenn pwoliferasyon evidan nan sit enplantasyon an (40 fwa). (B) Ou ka wè ke kondrosit yo ak selil ki sanble ak NP yo pwolifere anpil, epi fòm ak gwosè kondrosit yo inegal (40 fwa).
Yo te obsève ekspresyon mRNA interleukin 4 (IL-4), mRNA interleukin 17 (IL-17), ak mRNA interferon γ (IFN-γ) nan tou de gwoup NPE ak ME yo. Lè yo te konpare nivo ekspresyon jèn sib yo, ekspresyon jèn IL-4, IL-17, ak IFN-γ te ogmante siyifikativman nan gwoup NPE a konpare ak sa yo ki nan gwoup ME a ak gwoup operasyon simulation an (Fig. 4) (P < 0.05). Konpare ak gwoup operasyon simulation an, nivo ekspresyon IL-4, IL-17, ak IFN-γ nan gwoup ME a te ogmante sèlman yon ti kras epi yo pa t rive nan chanjman estatistik (P > 0.05).
Ekspresyon mRNA IL-4, IL-17 ak IFN-γ nan gwoup NPE a te montre yon tandans siyifikativman pi wo pase sa yo ki nan gwoup operasyon simulation an ak gwoup ME a (P < 0.05).
Okontrè, nivo ekspresyon nan gwoup ME a pa t montre okenn diferans siyifikatif (P>0.05).
Yo te fè analiz Western blot la lè l sèvi avèk antikò ki disponib nan komès kont IL-4 ak IL-17 pou konfime modèl ekspresyon mRNA ki te modifye a. Jan Figi 5A,B yo montre, konpare ak gwoup ME a ak gwoup operasyon simulasyon an, nivo pwoteyin IL-4 ak IL-17 nan gwoup NPE a te ogmante anpil (P < 0.05). Konpare ak gwoup operasyon simulasyon an, nivo pwoteyin IL-4 ak IL-17 nan gwoup ME a pa t rive nan chanjman estatistikman siyifikatif tou (P> 0.05).
(A) Nivo pwoteyin IL-4 ak IL-17 nan gwoup NPE a te siyifikativman pi wo pase sa yo ki nan gwoup ME a ak gwoup plasebo a (P < 0.05). (B) Istogram Western blot.
Akòz kantite limite echantiyon imen yo te jwenn pandan operasyon an, etid klè ak detaye sou patogenez MC a yon ti jan difisil. Nou te eseye etabli yon modèl animal MC pou etidye mekanis patolojik potansyèl li yo. An menm tan, evalyasyon radyolojik, evalyasyon istolojik ak evalyasyon byolojik molekilè yo te itilize pou swiv evolisyon MC ki pwovoke pa otogrèf NP. Kòm rezilta, modèl enplantasyon NP a te lakòz yon chanjman gradyèl nan entansite siyal la soti nan pwen tan 12 semèn rive nan pwen tan 20 semèn (siyal fèb melanje nan sekans T1W ak siyal fèb nan sekans T2W), ki endike chanjman tisi yo, epi evalyasyon istolojik ak byolojik molekilè yo te konfime rezilta etid radyolojik la.
Rezilta eksperyans sa a montre ke chanjman vizyèl ak istolojik te fèt nan sit vyolasyon kò vètebral la nan gwoup NPE a. An menm tan, yo te obsève ekspresyon jèn IL-4, IL-17 ak IFN-γ, ansanm ak IL-4, IL-17 ak IFN-γ, sa ki endike ke vyolasyon tisi pulposus nwayo otològ nan kò vètebral la ka lakòz yon seri chanjman siyal ak mòfolojik. Li fasil pou w remake ke karakteristik siyal kò vètebral modèl bèt la (siyal fèb nan sekans T1W, siyal melanje ak siyal fèb nan sekans T2W) yo trè menm jan ak sa yo ki nan selil vètebral imen yo, epi karakteristik IRM yo konfime tou obsèvasyon istoloji ak anatomi brit yo, sa vle di, chanjman ki fèt nan selil kò vètebral yo pwogresif. Malgre ke repons enflamatwa ki koze pa chòk egi a ka parèt touswit apre piki a, rezilta IRM yo te montre ke chanjman siyal ki ogmante pwogresivman te parèt 12 semèn apre piki a epi yo te pèsiste jiska 20 semèn san okenn siy rekiperasyon oswa ranvèsman chanjman IRM yo. Rezilta sa yo sijere ke NP vètebral otològ se yon metòd serye pou etabli MV pwogresif nan lapen.
Modèl pike sa a mande ase konpetans, tan, ak efò chirijikal. Nan eksperyans preliminè yo, diseksyon oswa twòp estimilasyon estrikti ligaman paravertebral yo ka lakòz fòmasyon osteofit vètebral. Fòk ou pran prekosyon pou ou pa domaje oswa irite disk adjasan yo. Piske nou dwe kontwole pwofondè penetrasyon an pou nou jwenn rezilta ki konsistan e ki ka repwodui, nou te fè yon bouchon alamen lè nou te koupe djenn yon zegwi 3 mm longè. Sèvi ak bouchon sa a asire yon pwofondè perçage inifòm nan kò vètebral la. Nan eksperyans preliminè yo, twa chirijyen ortopedik ki te patisipe nan operasyon an te jwenn ke zegwi 16 kalib yo pi fasil pou itilize pase zegwi 18 kalib oswa lòt metòd perçage. Pou evite twòp senyen pandan perçage a, kenbe zegwi a toujou pou yon ti tan ap bay yon twou ensèsyon ki pi apwopriye, sa ki sijere ke nou ka kontwole yon sèten degre MC nan fason sa a.
Malgre ke anpil etid te vize MC, yo pa konnen anpil bagay sou etioloji ak patogenez MC25,26,27. Baze sou etid anvan nou yo, nou te jwenn ke otoiminite jwe yon wòl kle nan aparisyon ak devlopman MC12. Etid sa a te egzamine ekspresyon kantitatif IL-4, IL-17, ak IFN-γ, ki se prensipal chemen diferansyasyon selil CD4+ apre estimilasyon antijèn. Nan etid nou an, konpare ak gwoup negatif la, gwoup NPE a te gen pi gwo ekspresyon IL-4, IL-17, ak IFN-γ, epi nivo pwoteyin IL-4 ak IL-17 yo te pi wo tou.
Klinikman, ekspresyon IL-17 mRNA ogmante nan selil NP ki soti nan pasyan ki gen èrni disk28. Yo te jwenn tou yon ogmantasyon nan nivo ekspresyon IL-4 ak IFN-γ nan yon modèl èrni disk egi ki pa konpresif konpare ak temwen ki an sante29. IL-17 jwe yon wòl kle nan enflamasyon, blesi tisi nan maladi otoiminitè30 epi li amelyore repons iminitè a kont IFN-γ31. Yo rapòte yon ogmantasyon nan blesi tisi ki medyatè pa IL-17 nan sourit MRL/lpr32 ak sourit ki sansib a otoiminite33. IL-4 ka anpeche ekspresyon sitokin proenflamatwa (tankou IL-1β ak TNFα) ak aktivasyon makrofaj34. Yo te rapòte ke ekspresyon mRNA IL-4 la te diferan nan gwoup NPE a konpare ak IL-17 ak IFN-γ nan menm moman an; Ekspresyon mRNA IFN-γ nan gwoup NPE a te siyifikativman pi wo pase sa ki nan lòt gwoup yo. Se poutèt sa, pwodiksyon IFN-γ ka yon medyatè nan repons enflamatwa ki pwovoke pa entèkalasyon NP. Etid yo montre ke IFN-γ pwodui pa plizyè kalite selil, tankou selil T helper tip 1 aktive, selil asasen natirèl, ak makrofaj35,36, epi li se yon sitokin pro-enflamatwa kle ki ankouraje repons iminitè37.
Etid sa a sijere ke repons otoiminitè a ka enplike nan aparisyon ak devlopman MC. Luoma et al. te jwenn ke karakteristik siyal MC ak NP enpòtan yo sanble sou IRM, epi tou de montre yon siyal wo nan sekans T2W38. Gen kèk sitokin ki te konfime ke yo asosye avèk aparisyon MC, tankou IL-139. Ma et al. te sijere ke pwotizyon anlè oswa anba NP a ka gen yon gwo enfliyans sou aparisyon ak devlopman MC12. Bobechko40 ak Herzbein et al.41 te rapòte ke NP se yon tisi imunotoleran ki pa ka antre nan sikilasyon vaskilè a depi nesans. Pwotizyon NP yo entwodui kò etranje nan rezèv san an, kidonk medyatè reyaksyon otoiminitè lokal yo42. Reyaksyon otoiminitè yo ka pwovoke yon gwo kantite faktè iminitè, epi lè faktè sa yo ekspoze kontinyèlman nan tisi yo, yo ka lakòz chanjman nan siyalizasyon43. Nan etid sa a, surekspresyon IL-4, IL-17 ak IFN-γ se faktè iminitè tipik, ki pwouve plis relasyon sere ki genyen ant NP ak MC yo44. Modèl animal sa a byen imite antre NP a nan plak final la. Pwosesis sa a plis revele enpak otoiminite sou MC.
Jan nou te espere a, modèl animal sa a ban nou yon platfòm posib pou etidye MC. Sepandan, modèl sa a toujou gen kèk limitasyon: premyèman, pandan faz obsèvasyon animal la, gen kèk lapen nan etap entèmedyè ki bezwen eutanazi pou tès istolojik ak byoloji molekilè, kidonk gen kèk bèt ki "pa ka itilize ankò" avèk letan. Dezyèmman, byenke twa pwen tan yo fikse nan etid sa a, malerezman, nou sèlman modle yon sèl kalite MC (chanjman tip I Modic), kidonk li pa ase pou reprezante pwosesis devlopman maladi imen an, epi plis pwen tan bezwen fikse pou pi byen obsève tout chanjman siyal yo. Twazyèmman, chanjman nan estrikti tisi yo ka vrèman montre klèman pa koloran istolojik, men kèk teknik espesyalize ka pi byen revele chanjman mikwoestriktirèl yo nan modèl sa a. Pa egzanp, yo te itilize mikwoskopi limyè polarize pou analize fòmasyon fibrokartilaj nan disk entèvèrtebral lapen yo45. Efè alontèm NP sou MC ak plak final la mande plis etid.
Senkant-kat lapen blan Nouvèl Zelann (pwa anviwon 2.5-3 kg, laj 3-3.5 mwa) te divize owaza an gwoup operasyon simulation, gwoup enplantasyon misk (gwoup ME) ak gwoup enplantasyon rasin nè (gwoup NPE). Tout pwosedi eksperimantal yo te apwouve pa Komite Etik Lopital Tianjin nan, epi metòd eksperimantal yo te fèt an akò strik avèk direktiv apwouve yo.
Yo te fè kèk amelyorasyon nan teknik chirijikal S. Sobajima 46 la. Yo te mete chak lapen nan yon pozisyon kouche lateral epi yo te ekspoze sifas anterior senk disk entèvèrtebral lonbè (IVD) youn apre lòt lè l sèvi avèk yon apwòch retroperitoneyal posterolateral. Yo te bay chak lapen anestezi jeneral (20% uretan, 5 ml/kg atravè venn zòrèy la). Yo te fè yon ensizyon longitudinal sou po a soti nan kwen anba kòt yo rive nan rebò basen an, 2 cm ventral nan misk paravèrtebral yo. Yo te ekspoze kolòn vètebral anterolateral dwat la soti nan L1 rive nan L6 pa yon diseksyon byen file ak mou nan tisi soukutane ki anlè a, tisi retroperitoneyal la, ak misk yo (Fig. 6A). Yo te detèmine nivo disk la lè l sèvi avèk rebò basen an kòm yon repè anatomik pou nivo disk L5-L6 la. Sèvi ak yon zegwi pou pike 16-gauge pou fè yon twou toupre plak fen vèteb L5 la nan yon pwofondè 3 mm (Fig. 6B). Sèvi ak yon sereng 5 ml pou aspire nwayo pulpos otològ la nan disk entèvèrtebral L1-L2 a (Fig. 6C). Retire nwayo pulpos la oswa misk la selon bezwen chak gwoup. Apre yo fin fouye twou a pi fon, yo mete sutur ki ka absòbe sou fasya pwofon an, fasya sifasyal la ak po a, pran prekosyon pou yo pa domaje tisi peryostè kò vètebral la pandan operasyon an.
(A) Yo ekspoze disk L5-L6 la atravè yon apwòch posterolateral retroperitoneyal. (B) Sèvi ak yon zegwi 16-gauge pou fè yon twou toupre plak final L5 la. (C) Yo pran MF otològ yo.
Yo te administre anestezi jeneral avèk 20% uretan (5 ml/kg) nan venn zòrèy la, epi yo te repete radyografi kolòn vètebral lonbè yo 12, 16, ak 20 semèn apre operasyon an.
Yo te sakrifye lapen yo grasa yon enjeksyon entramuskilè ketamin (25.0 mg/kg) ak pentobarbital sodyòm nan venn (1.2 g/kg) nan 12, 16 ak 20 semèn apre operasyon an. Yo te retire tout kolòn vètebral la pou analiz istolojik epi yo te fè yon analiz reyèl. Yo te itilize transkripsyon ranvèse kantitatif (RT-qPCR) ak Western blotting pou detekte chanjman nan faktè iminitè yo.
Yo te fè egzamen IRM sou lapen lè l sèvi avèk yon leman klinik 3.0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) ekipe ak yon reseptè bobin manm ortogonal. Yo te anestezi lapen yo ak 20% uretan (5 mL/kg) atravè venn zòrèy la epi answit yo te mete yo kouche sou do andedan leman an ak rejyon lonbè a santre sou yon bobin sifas sikilè 5 pous dyamèt (GE Medical Systems). Yo te pran imaj lokalizatè koronal T2-pondere (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) pou defini kote disk lonbè a soti nan L3-L4 rive nan L5-L6. Yo te pran tranch plan sajital T2-pondere ak paramèt sa yo: sekans spin-eko rapid ak yon tan repetisyon (TR) de 2200 ms ak yon tan eko (TE) de 70 ms, matris; chan vizyèl 260 ak uit estimilis; Epesè koupe a te 2 mm, espas la te 0.2 mm.
Apre yo te fin pran dènye foto a epi yo te touye dènye lapen an, yo te retire disk fo a, disk ki te gen misk yo ladan l, ak disk NP yo pou yo te ka egzamine yo istolojikman. Yo te fikse tisi yo nan 10% formalin tampon net pandan 1 semèn, yo te dekalsifye yo ak asid etilèn diamin tetraasetik, epi yo te koupe yo nan parafin. Yo te mete blòk tisi yo nan parafin epi yo te koupe yo an seksyon sajital (5 μm epesè) lè l sèvi avèk yon mikwotòm. Yo te kolore seksyon yo ak ematoksilin ak eozin (H&E).
Apre yo te fin kolekte disk entèvèrtebral yo nan men lapen yo nan chak gwoup, yo te ekstrè ARN total la lè l sèvi avèk yon kolòn UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Lachin) dapre enstriksyon manifakti a ak yon sistèm transkripsyon envès ImProm II (Promega Inc., Madison, WI, USA). Yo te fè transkripsyon envès.
Yo te fè RT-qPCR a avèk yon Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) ak SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) dapre enstriksyon manifakti a. Volim reyaksyon PCR a te 20 μl epi li te genyen 1.5 μl ADNc dilye ak 0.2 μM nan chak amorseur. OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) te desine amorseur yo epi Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Lachin) te fabrike yo (Tablo 1). Yo te itilize kondisyon siklaj tèmik sa yo: etap aktivasyon polimeraz inisyal a 94°C pandan 2 minit, answit 40 sik 15 s chak a 94°C pou denaturasyon modèl, rekwis pandan 1 minit a 60°C, ekstansyon, ak fluoresans. Mezi yo te fèt pandan 1 minit a 72°C. Yo te anplifye tout echantiyon yo twa fwa epi yo te itilize valè mwayèn nan pou analiz RT-qPCR. Yo te analize done anplifikasyon yo lè l sèvi avèk FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). Yo te normalize ekspresyon jèn IL-4, IL-17, ak IFN-γ parapò ak kontwòl andojèn nan (ACTB). Yo te kalkile nivo ekspresyon relatif ARNm sib la lè l sèvi avèk metòd 2-ΔΔCT la.
Yo te ekstrè pwoteyin total la nan tisi yo lè l sèvi avèk yon omojenizatè tisi nan yon tanpon liz RIPA (ki gen yon melanj inibitè pwoteyaz ak fosfataz) epi answit yo te santrifije l a 13,000 rpm pandan 20 minit a 4°C pou retire debri tisi yo. Yo te chaje senkant mikwogram pwoteyin pa liy, separe pa 10% SDS-PAGE, epi answit transfere l nan yon manbràn PVDF. Yo te fè blokaj la nan 5% lèt an poud san grès nan yon saline tamponne Tris (TBS) ki gen 0.1% Tween 20 pandan 1 èdtan nan tanperati chanm. Yo te enkube manbràn nan ak antikò prensipal lapen anti-dekorin (dilye 1:200; Boster, Wuhan, Lachin) (dilye 1:200; Bioss, Beijing, Lachin) pandan tout lannwit lan a 4°C epi yo te reyaji nan dezyèm jou a; avèk antikò segondè (imunoglobulin G kabrit anti-lapen nan dilisyon 1:40,000) konbine avèk peroksidaz raifò (Boster, Wuhan, Lachin) pandan 1 èdtan nan tanperati chanm. Siyal Western blot yo te detekte pa ogmantasyon chimiluminesans sou manbràn chimiluminesans lan apre iradyasyon reyon X. Pou analiz densitometrik, blot yo te eskane epi quantifye lè l sèvi avèk lojisyèl BandScan epi rezilta yo te eksprime kòm rapò imunoreyaktivite jèn sib la ak imunoreyaktivite tibilin.
Kalkil estatistik yo te fèt lè l sèvi avèk lojisyèl SPSS16.0 (SPSS, Etazini). Done yo te kolekte pandan etid la te eksprime kòm mwayèn ± devyasyon estanda (mwayèn ± SD) epi yo te analize yo lè l sèvi avèk analiz varyans mezi repete yon sèl chemen (ANOVA) pou detèmine diferans ki genyen ant de gwoup yo. Yo te konsidere yon P < 0.05 kòm estatistikman siyifikatif.
Kidonk, etablisman yon modèl animal MC lè yo enplante NP otològ nan kò vètebral la epi fè obsèvasyon makroanatomik, analiz IRM, evalyasyon istolojik ak analiz byolojik molekilè ka vin yon zouti enpòtan pou evalye ak konprann mekanis MC imen an epi devlope nouvo entèvansyon terapetik.
Kijan pou site atik sa a: Han, C. et al. Yo te etabli yon modèl bèt pou chanjman Modic yo lè yo te enplante yon nwayo pulpos otològ nan zo soukondral kolòn vètebral lonbè a. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., ak Boos, N. Imaj pa rezonans mayetik nan kolòn vètebral lonbè a: prevalans èrni disk ak retansyon, konpresyon rasin nè, anomali plak fen, ak osteoartrit jwenti fasèt nan volontè asimptomatik. Rate. Radyoloji 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, ak Leboeuf-Eed, K. Chanjman modik ak relasyon yo ak rezilta klinik yo. Jounal Kolòn Vètebral Ewopeyen an: piblikasyon ofisyèl Sosyete Kolòn Vètebral Ewopeyen an, Sosyete Deformite Kolòn Vètebral Ewopeyen an, ak Sosyete Ewopeyen pou Rechèch Kolòn Vètebral Sèvikal la 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Chanjman modik nan plak fen vètebral lonbè yo: prevalans ak asosyasyon avèk doulè nan do ba ak syatik nan travayè gason ki gen laj mwayen. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., ak Dalinka, M. IRM chanjman nan mwèl zo toupre plak final la nan maladi dejeneratif nan kolòn vètebral lonbè a. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, ak Carter, JR Maladi disk dejeneratif: evalyasyon chanjman nan mwèl vètebral ak IRM. Radyoloji 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, ak Carter, JR Imaj maladi disk dejeneratif. Radyoloji 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Prediktè plak final neovertebral (Modic) siyal chanjman nan popilasyon jeneral la. European Spine Journal: Piblikasyon ofisyèl Sosyete Kolòn Vètebral Ewopeyen an, Sosyete Ewopeyen pou Deformite Kolòn Vètebral, ak Sosyete Ewopeyen pou Rechèch Kolòn Vètebral Sèvikal, Divizyon 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB ak Mannisch, K. Chanjman modik apre yon èrni disk lonbè. Jounal Kolòn Vètebral Ewopeyen an: Piblikasyon Ofisyèl Sosyete Kolòn Vètebral Ewopeyen an, Sosyete Ewopeyen pou Defòmite Kolòn Vètebral la ak Sosyete Ewopeyen pou Rechèch Kolòn Vètebral Sèvikal la 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., ak Kaapa, E. Chanjman Modic tip I yo ka predi yon dejenerasyon disk defòmasyonèl rapidman pwogresif: yon etid prospektiv 1 an. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ ak Fan, SW Chanjman modik: kòz posib ak kontribisyon nan dejenerasyon disk lonbè. Ipotèz Medikal 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Kraze disk entèn. Pwoblèm prolaps disk sou plis pase 50 ane. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Dat piblikasyon: 13 Desanm 2024