Mèsi pou vizite Nature.com. Vèsyon an navigatè w ap itilize gen limite CSS sipò. Pou pi bon rezilta, nou rekòmande lè l sèvi avèk yon navigatè plus (oswa enfimite mòd konpatibilite nan Internet Explorer). Nan entre -temps la, asire kontinye sipò, nou pral montre sit la san yo pa Styles ak JavaScript.
Kreyasyon modèl bèt nan chanjman modik (MC) se yon baz enpòtan pou etidye MC. Senkant-kat New Zeland lapen blan yo te divize an imitation-operasyon gwoup, gwoup enplantasyon nan misk (ME gwoup) ak nwayo pulposus gwoup enplantasyon (NPE gwoup). Nan gwoup la NPE, yo te disk la entèrvèrtebral ekspoze pa anterolateral apwòch chirijikal lonbèr ak yon zegwi te itilize twou kò a L5 vètebral tou pre plak la fen. NP te extrait soti nan disk la L1/2 entèrvèrtebral pa yon sereng ak sou fòm piki nan li. Drilling yon twou nan zo a subchondral. Pwosedi chirijikal ak metòd perçage nan gwoup enplantasyon nan misk ak gwoup la imitation-operasyon yo te menm jan ak sa yo ki nan gwoup la enplantasyon NP. Nan gwoup ME a, yo te mete yon moso nan misk nan twou a, pandan ke yo nan gwoup la imitation-operasyon, pa gen anyen yo te mete nan twou a. Apre operasyon an, MRI optik ak molekilè tès byolojik yo te fèt. Siyal la nan gwoup la NPE chanje, men pa te gen okenn chanjman siyal evidan nan gwoup la imitation-operasyon ak gwoup la ME. Obsèvasyon istolojik te montre ke te pwopagasyon tisi nòmal obsève nan sit la enplantasyon, ak ekspresyon an nan IL-4, IL-17 ak IFN-γ te ogmante nan gwoup la NPE. Enplantasyon nan NP nan zo a subchondral ka fòme yon modèl bèt nan MC.
Chanjman Modic (MC) yo se blesi nan fen yo vètebral ak adjasan mwèl zo vizib sou D 'sonorite mayetik (MRI). Yo se byen komen nan moun ki gen sentòm ki asosye1. Anpil etid te mete aksan sou enpòtans ki genyen nan MC akòz asosyasyon li yo ak doulè nan do ki ba (LBP) 2,3. De Roos et al.4 ak Modic et al.5 endepandamman premye dekri twa diferan kalite anomali siyal subchondral nan mwèl nan zo vètebral. Modik kalite mwen chanjman yo hypointense sou T1-weighted (T1W) sekans ak hyperintense sou T2-weighted (T2W) sekans. Sa a lezyonèl revele fen fen ak adjasan tisi granulasyon vaskilè nan mwèl zo a. Chanjman MODIC TIP II montre gwo siyal sou tou de sekans T1W ak T2W. Nan sa a ki kalite lezyonèl, ka destriksyon inplate ka jwenn, menm jan tou istolojik ranplasman gra nan mwèl zo adjasan an. Chanjman MODIC TIP III montre siyal ki ba nan sekans T1W ak T2W. Blesi sklerotik ki koresponn ak endplates yo te obsève6. MC konsidere kòm yon maladi pathologie nan kolòn vètebral la ak se byen asosye ak anpil maladi dejeneratif nan kolòn vètebral la7,8,9.
Lè ou konsidere done ki disponib yo, plizyè etid te bay Sur detaye nan etyoloji a ak mekanism pathologie nan MC. Albert et al. sijere ke MC ka ki te koze pa Herniation Disk8. Hu et al. atribiye MC a Degeneration10 disk grav. Kroc pwopoze konsèp nan "kraze disk entèn yo," ki deklare ke repetitif chòk disk ka mennen nan microtears nan endplate la. Apre fòmasyon fann, destriksyon endplate pa nwayo pulposus la (NP) ka deklanche yon repons auto -immunes, ki pli lwen mennen nan devlopman nan MC11. Ma et al. Pataje yon View menm jan ak rapòte ke NP-induit oto-iminite jwe yon wòl kle nan patojenèz la nan MC12.
Selil sistèm iminitè yo, espesyalman CD4+ T lenfosit asistan, jwe yon wòl enpòtan nan patojenèz la nan autoimmunity13. Dènyèman dekouvri Th17 sou-gwoup la pwodui sitokin proinflammatory IL-17 la, fè pwomosyon ekspresyon chemokine, ak stimul selil T nan ògàn domaje yo pwodwi IFN-γ14. Selil Th2 tou jwe yon wòl inik nan patojenèz la nan repons iminitè yo. Ekspresyon IL-4 kòm yon selil reprezantan Th2 ka mennen nan konsekans imunopatolojik grav15.
Malgre ke anpil etid klinik yo te fèt sou MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, gen toujou yon mank de modèl apwopriye bèt eksperimantal ki ka imite pwosesis la MC ki souvan rive nan imen epi yo ka Itilize pou envestige etyoloji a oswa nouvo tretman tankou terapi vize. Pou dat, se sèlman yon modèl bèt kèk nan MC yo te rapòte yo etidye mekanis yo kache pathologie.
Baze sou teyori a auto -immunes ki te pwopoze pa Albert ak MA, etid sa a etabli yon senp ak repwodwi lapen modèl MC pa autotransplanting NP tou pre plak la komanse fouye fen vètebral. Lòt objektif yo dwe obsève karakteristik istolojik modèl bèt yo ak evalye mekanis espesifik NP nan devlopman MC. Pou sa ka fèt, nou itilize teknik tankou byoloji molekilè, MRI, ak syans istolojik yo etidye pwogresyon nan MC.
De lapen te mouri nan senyen pandan operasyon an, ak kat lapen te mouri pandan anestezi pandan MRI. Rès 48 lapen yo siviv epi yo te montre okenn siy konpòtman oswa newolojik apre operasyon an.
MRI montre ke entansite a siyal nan tisi a entegre nan twou diferan se diferan. Entansite a siyal nan kò a L5 vètebral nan gwoup la NPE piti piti chanje nan 12, 16 ak 20 semèn apre ensèsyon (sekans T1W te montre siyal ki ba, ak sekans T2W te montre siyal melanje plis siyal ki ba) (Fig. 1C), pandan y ap aparisyon yo MRI nan de lòt gwoup yo nan pati entegre rete relativman ki estab pandan menm peryòd la (Fig. 1A, B).
(A) Reprezantan sekans MRIs nan kolòn vètebral la lonbèr lapen nan 3 pwen tan. Pa gen okenn anomali siyal yo te jwenn nan imaj yo nan gwoup la imitation-operasyon. (B) karakteristik siyal yo nan kò a vètebral nan gwoup la ME yo sanble ak sa yo ki nan gwoup la imitation-operasyon, e pa gen okenn chanjman siyal siyifikatif obsève nan sit la selaj sou tan. (C) Nan gwoup la NPE, siyal la ki ba se vizib klèman nan sekans lan T1W, ak siyal la melanje ak siyal ki ba yo vizib klèman nan sekans lan T2W. Soti nan peryòd la 12-semèn nan peryòd la 20-semèn, siyal yo detanzantan segondè ki antoure siyal yo ki ba nan diminye nan sekans T2W.
Ka evidan hyperplasia zo ka wè nan sit la enplantasyon nan kò a vètebral nan gwoup la NPE, ak hyperplasia nan zo rive pi vit soti nan 12 a 20 semèn (Fig. 2C) konpare ak gwoup la NPE, pa gen okenn chanjman enpòtan obsève nan vètebral la modle kò; Gwoup imitation ak mwen gwoup (Fig. 2C) 2a, b).
(A) sifas la nan kò a vètebral nan pòsyon an anjandre se trè lis, twou a geri byen, epi pa gen okenn hyperplasia nan kò a vètebral. (B) fòm nan sit la anjandre nan gwoup la ME se menm jan ak sa ki nan gwoup la operasyon imitation, epi pa gen okenn chanjman evidan nan aparans nan sit la anjandre sou tan. (C) Hyperplasia zo ki te fèt nan sit la anjandre nan gwoup la NPE. Hyperplasia nan zo ogmante rapidman e menm pwolonje nan disk la entèrvèrtebral nan kò a contralateral vètebral.
Istolojik analiz bay plis enfòmasyon detaye sou fòmasyon zo yo. Figi 3 montre foto yo nan seksyon yo postoperatwar tache ak H&E. Nan gwoup la imitation-operasyon, chondrocytes yo te byen ranje e pa gen okenn pwopagasyon selil yo te detekte (Fig. 3A). Sitiyasyon an nan gwoup la ME te menm jan ak sa ki nan gwoup la imitation-operasyon (Fig. 3B). Sepandan, nan gwoup la NPE, yon gwo kantite chondrocytes ak pwopagasyon nan NP-tankou selil yo te obsève nan sit la enplantasyon (Fig. 3C);
(A) Trabeculae ka wè tou pre plak la fen, chondrocytes yo nètman ranje ak gwosè selil inifòm ak fòm ak pa gen okenn pwopagasyon (40 fwa). (B) kondisyon an nan sit la enplantasyon nan gwoup la ME se menm jan ak sa yo ki an gwoup la imitation. Trabeculae ak chondrocytes ka wè, men pa gen okenn pwopagasyon evidan nan sit la enplantasyon (40 fwa). (B) Li ka wè ke chondrocytes ak NP-tankou selil proliferasyon siyifikativman, ak fòm nan ak gwosè nan chondrocytes yo inegal (40 fwa).
Ekspresyon interleukin 4 (IL-4) mRNA, interleukin 17 (IL-17) mRNA, ak interferon γ (IFN-γ) mRNA te obsève nan tou de gwoup yo NPE ak ME. Lè yo te konpare nivo ekspresyon jèn sib yo, ekspresyon jèn yo nan IL-4, IL-17, ak IFN-γ te siyifikativman ogmante nan gwoup la NPE konpare ak sa yo ki nan gwoup la ME ak gwoup la operasyon imitation (Fig. 4) (P <0.05). Konpare ak gwoup la operasyon imitation, nivo yo ekspresyon nan IL-4, IL-17, ak IFN-γ nan gwoup la ME ogmante sèlman yon ti kras epi yo pa t 'rive nan estatistik chanjman (P> 0.05).
Ekspresyon mRNA nan IL-4, IL-17 ak IFN-γ nan gwoup la NPE te montre yon tandans siyifikativman pi wo pase sa yo ki nan gwoup la operasyon imitation ak gwoup la ME (p <0.05).
Nan contrast, nivo yo ekspresyon nan gwoup la ME te montre pa gen okenn diferans siyifikatif (p> 0.05).
Western analiz efase te fè lè l sèvi avèk antikò komèsyal ki disponib kont IL-4 ak IL-17 konfime modèl la ekspresyon mRNA chanje. Jan yo montre nan figi 5A, B, konpare ak gwoup la ME ak gwoup la operasyon imitation, nivo yo pwoteyin nan IL-4 ak IL-17 nan gwoup la NPE yo te siyifikativman ogmante (P <0.05). Konpare ak gwoup la operasyon imitation, nivo yo pwoteyin nan IL-4 ak IL-17 nan gwoup la ME tou echwe pou pou rive nan estatistik chanjman enpòtan (p> 0.05).
(A) nivo pwoteyin nan IL-4 ak IL-17 nan gwoup la NPE yo te siyifikativman pi wo pase sa yo ki nan gwoup la ME ak gwoup plasebo (P <0.05). (B) Western Istogram blot.
Akòz kantite limite nan echantiyon moun jwenn pandan operasyon, klè ak etid detaye sou patojenèz la nan MC yo se yon ti jan difisil. Nou te eseye etabli yon modèl bèt nan MC yo etidye mekanis potansyèl li yo pathologie. An menm tan an, yo te evalyasyon radyolojik, evalyasyon istolojik ak molekilè evalyasyon byolojik yo te itilize yo swiv kou a nan MC pwovoke pa NP autograft. Kòm yon rezilta, modèl la enplantasyon NP a nan yon chanjman gradyèl nan entansite siyal soti nan 12-semèn pwen tan 20-semèn (melanje siyal ki ba nan sekans T1W ak siyal ki ba nan sekans T2W), ki endike chanjman tisi, ak istolojik la ak molekilè Evalyasyon byolojik konfime rezilta yo nan etid la radyolojik.
Rezilta eksperyans sa a montre ke chanjman vizyèl ak istolojik ki te fèt nan sit la nan kontravansyon kò vètebral nan gwoup la NPE. An menm tan an, ekspresyon an nan IL-4, IL-17 ak IFN-γ jèn, osi byen ke IL-4, IL-17 ak IFN-γ yo te obsève, ki endike ke kontravansyon an nan tisi otolog nwayo pulposus nan vètebral la Kò ka lakòz yon seri de siyal ak chanjman mòfoloji. Li fasil jwenn ke karakteristik yo ki siyal nan kò yo vètebral nan modèl la bèt (siyal ki ba nan sekans lan T1W, siyal melanje ak siyal ki ba nan sekans lan T2W) yo trè menm jan ak sa yo ki nan selil vètebral moun, ak karakteristik yo ki MRI tou Konfime obsèvasyon yo nan istoloji ak anatomi brit, se sa ki, chanjman ki fèt nan selil yo kò vètebral yo pwogresis. Malgre ke repons lan enflamatwa ki te koze pa chòk egi ka parèt touswit apre twou, rezilta MRI te montre ke progresivman ogmante chanjman siyal parèt 12 semèn apre twou ak pèsiste jiska 20 semèn san okenn siy rekiperasyon oswa lan vè nan chanjman MRI. Rezilta sa yo sijere ke otolog vètebral NP se yon metòd serye pou etabli pwogresis MV nan lapen.
Modèl twou sa a egzije bon jan konpetans, tan, ak efò chirijikal. Nan eksperyans preliminè, diseksyon oswa eksitasyon twòp nan estrikti yo paravertebral ligaman ka rezilta nan fòmasyon nan osteofit vètebral. Yo ta dwe pran swen pou yo pa domaje oswa irite disk yo adjasan. Depi yo dwe pwofondè nan pénétration dwe kontwole jwenn rezilta ki konsistan ak repwodwi, nou manyèlman te fè yon ploge pa koupe djenn nan yon 3 mm zegwi long. Sèvi ak sa a ploge asire inifòm pwofondè perçage nan kò a vètebral. Nan eksperyans preliminè, twa medsen topedik ki enplike nan operasyon an yo te jwenn 16-kalib zegwi pi fasil yo travay avèk pase 18-kalib zegwi oswa lòt metòd. Pou evite twòp senyen pandan perçage, kenbe zegwi a toujou pou yon ti tan ap bay yon twou ensèsyon plis apwopriye, sijere ke yon sèten degre nan MC ka kontwole nan fason sa a.
Malgre ke anpil etid yo te vize MC, ti kras se li te ye sou etyoloji a ak patojenèz nan MC25,26,27. Baze sou etid anvan nou yo, nou te jwenn ke oto -iminite jwe yon wòl kle nan ensidan an ak devlopman nan MC12. Etid sa a egzamine ekspresyon quantitative nan IL-4, IL-17, ak IFN-γ, ki se wout yo diferansyasyon prensipal nan CD4+ selil apre eksitasyon antigen. Nan etid nou an, konpare ak gwoup la negatif, gwoup la NPE te gen pi wo ekspresyon nan IL-4, IL-17, ak IFN-γ, ak nivo yo pwoteyin nan IL-4 ak IL-17 yo te tou pi wo.
Klinikman, IL-17 mRNA ekspresyon ogmante nan selil NP soti nan pasyan ki gen disk herniation28. Ogmantasyon nivo ekspresyon IL-4 ak IFN-γ yo te jwenn tou nan yon modèl egi ki pa konpresyon disk ki te konpare ak kontwòl ki an sante29. IL-17 jwe yon wòl kle nan enflamasyon, aksidan tisi nan maladi auto-immunes30 ak amelyore repons iminitè a IFN-γ31. Enhanced IL-17-medyatè aksidan tisi te rapòte nan MRL/LPR sourit32 ak sourit autoimmunity-sansib33. IL-4 ka anpeche ekspresyon sitokin proinflamatwa (tankou IL-1β ak TNFα) ak aktivasyon macrofaj34. Li te rapòte ke ekspresyon an mRNA nan IL-4 te diferan nan gwoup la NPE konpare ak IL-17 ak IFN-γ nan pwen an menm tan; Ekspresyon mRNA nan IFN-γ nan gwoup la NPE te siyifikativman pi wo pase sa ki nan lòt gwoup yo. Se poutèt sa, IFN-γ pwodiksyon ka yon medyatè nan repons lan enflamatwa pwovoke pa NP intercalation. Etid yo montre ke IFN-γ se ki te pwodwi pa kalite selil miltip, ki gen ladan aktive kalite 1 k'ap vin ede selil T, selil asasen natirèl, ak macrophages35,36, e se yon kle sitokin pro-enflamatwa ki fè pwomosyon repons iminitè37.
Etid sa a sijere ke repons auto -immunes ka patisipe nan ensidan an ak devlopman nan MC. Luoma et al. te jwenn ke karakteristik yo ki siyal nan MC ak enpòtan NP yo sanble sou MRI, ak tou de montre siyal segondè nan sekans T2W38. Gen kèk sitokin ki te konfime yo dwe asosye ak ensidan an nan MC, tankou IL-139. Ma et al. sigjere ke anwo oswa anba ti kras nan NP ka gen yon gwo enfliyans sou ensidan an ak devlopman nan MC12. Bobechko40 ak Herzbein et al.41 rapòte ke NP se yon tisi imunotolerans ki pa ka antre nan sikilasyon an vaskilè soti nan nesans la. NP NP entwodwi kò etranje nan rezèv la san, kidonk medyatè reyaksyon lokal otoiminitè42. Reyaksyon auto -immunes ka pwovoke yon gwo kantite faktè iminitè, ak lè faktè sa yo yo kontinyèlman ekspoze a tisi yo, yo ka lakòz chanjman nan siyal43. Nan etid sa a, surèkspresyon nan IL-4, IL-17 ak IFN-γ yo se tipik faktè iminitè, plis pwouve relasyon an fèmen ant NP ak MCS44. Modèl bèt sa a byen repwodwi zouti NP la ak antre nan plak la fen. Pwosesis sa a plis revele enpak la nan oto -iminite sou MC.
Kòm espere, modèl sa a bèt bay nou ak yon platfòm posib yo etidye MC. Sepandan, modèl sa a toujou gen kèk limit: premyèman, pandan faz nan obsèvasyon bèt, kèk lapen entèmedyè-etap bezwen yo dwe etanaz pou tès istolojik ak molekilè byoloji, se konsa kèk bèt "tonbe soti nan itilize" sou tan. Dezyèmman, byenke twa pwen tan yo mete nan etid sa a, malerezman, nou sèlman modle yon kalite MC (Modik Kalite mwen chanje), kidonk li se pa ase yo reprezante pwosesis la devlopman maladi moun, ak plis pwen tan bezwen yo dwe mete nan Pi bon obsève tout chanjman siyal yo. Twazyèmman, chanjman ki fèt nan estrikti tisi ka tout bon dwe klèman montre pa tach istolojik, men kèk teknik espesyalize ka pi byen revele chanjman yo microstructural nan modèl sa a. Pou egzanp, yo te polarize mikroskopi limyè itilize analize fòmasyon nan fibrokartilaj nan lapen entèrvertebral disk45. Efè alontèm nan NP sou MC ak endplate mande pou plis etid.
Senkant-kat gason New Zeland lapen blan (pwa sou 2.5-3 kg, laj 3-3.5 mwa) yo te divize owaza nan gwoup operasyon imitation, gwoup enplantasyon nan misk (ME gwoup) ak gwoup enplantasyon rasin nè (NPE gwoup). Tout pwosedi eksperimantal yo te apwouve pa Komite a Etik nan Tianjin Lopital, ak metòd yo eksperimantal yo te te pote soti nan dapre strik ak direktiv ki apwouve yo.
Gen kèk amelyorasyon ki te fèt nan teknik chirijikal S. Sobajima 46. Chak lapen yo te mete yo nan yon pozisyon recumbency lateral ak sifas la antérieure nan senk konsekitif disk entèrvèrtebral lonbèr (IVDs) te ekspoze lè l sèvi avèk yon apwòch retroperitoneal posterolateral. Chak lapen te bay anestezi jeneral (20% urethane, 5 ml/kg via venn nan zòrèy). Yo te fè yon ensizyon po Longitudinal te fè soti nan kwen ki pi ba nan zo kòt yo nan rebò basen an, 2 cm ventral nan misk yo paravertebral. Dwa anterolateral kolòn vètebral la soti nan L1 a L6 te ekspoze pa disèksyon byen file ak febli nan tisi a souse souk, tisi retroperitoneal, ak misk (Fig. 6A). Nivo disk la te detèmine lè l sèvi avèk rebò basen an kòm yon bòn tè anatomik pou nivo a disk L5-L6. Sèvi ak yon zegwi piki 16-kalib fè egzèsis yon twou tou pre plak la fen nan vètebral la L5 nan yon pwofondè nan 3 mm (Fig. 6B). Sèvi ak yon sereng 5-mL pou aspirate otolog nwayo pulposus la nan disk entèrvèrtebral L1-L2 (Fig. 6C). Retire nwayo pulposus la oswa nan misk dapre kondisyon ki nan chak gwoup. Apre yo fin fè egzèsis twou a apwofondi, sutur absorbabl yo mete sou pano a gwo twou san fon, pano supèrfisyèl ak po, pran swen pa domaje tisi a periosteal nan kò a vètebral pandan operasyon an.
(A) disk la L5 -L6 ekspoze atravè yon apwòch retroperitoneal posterolateral. (B) Sèvi ak yon zegwi 16-kalib fè egzèsis yon twou tou pre plak la L5. (C) MF otolog yo rekolt.
Anestezi jeneral te administre ak 20% urethane (5 mL/kg) administre atravè venn nan zòrèy, ak radyografi kolòn vètebral lonbèr yo te repete nan 12, 16, ak 20 semèn apre operasyon.
Lapen yo te sakrifye pa piki nan misk nan ketamin (25.0 mg/kg) ak nan venn sodyòm pentobarbital (1.2 g/kg) nan 12, 16 ak 20 semèn apre operasyon. Te kolòn vètebral la tout retire pou analiz istolojik ak analiz reyèl te fèt. Kwantitatif transkripsyon ranvèse (RT-QPCR) ak Western blot yo te itilize yo detekte chanjman ki fèt nan faktè iminitè yo.
Egzamen MRI yo te fèt nan lapen lè l sèvi avèk yon 3.0 T nan klinik leman (GE Medikal Sistèm, Florence, SC) ekipe ak yon reseptè orthogonal bobin manm. Lapen yo te anestezi ak 20% urethane (5 mL/kg) atravè venn nan zòrèy ak Lè sa a, yo mete yo kouche nan leman an ak rejyon an lonbèr santre sou yon dyamèt 5-pous bobin sifas sikilè (GE sistèm medikal). Imaj koronal T2-weighted lokalize (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) yo te akeri yo defini ki kote disk la lonbèr soti nan L3-L4 a L5-L6. Sagittal avyon T2-weighted tranch yo te akeri ak anviwònman sa yo: vit vire-eko sekans ak yon tan repetisyon (TR) nan 2200 ms ak yon tan eko (TE) nan 70 ms, matris; jaden vizyèl nan 260 ak uit stimuli; Epesè a koupe te 2 mm, diferans lan te 0.2 mm.
Apre yo te pran dènye foto a ak dènye lapen an te mouri, imitation a, nan misk-entegre, ak disk NP yo te retire pou egzamen istolojik. Tisi yo te fiks nan 10% net tampon formalin pou 1 semèn, decalcified ak ethylenediaminetetraacetic asid, ak parafine seksyon. Blòk tisi yo te entegre nan parafine ak koupe nan seksyon sagittal (5 μm epè) lè l sèvi avèk yon microtome. Seksyon yo te tache ak ematoksilin ak eozin (H&E).
Apre kolekte disk yo entèrvèrtebral soti nan lapen yo nan chak gwoup, yo te total RNA extrait lè l sèvi avèk yon kolòn UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biyoteknoloji co, Ltd, Lachin) dapre enstriksyon fabrikan an ak yon Improm II sistèm transkripsyon ranvèse (Promega Inc. , Madison, WI, USA). Transcription ranvèse te fèt.
RT-QPCR te fèt lè l sèvi avèk yon PRISM 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) ak SYBR Green Jump Start Taq Readymix (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) dapre enstriksyon fabrikan an. Volim nan reyaksyon PCR te 20 μl ak ki genyen 1.5 μl nan dilye cDNA ak 0.2 μm nan chak Jadendanfan. Premye yo te fèt pa designer oligoperfect (Invitrogen, Valencia, CA) ak manifaktire pa Nanjing Golden Stewart Biyoteknoloji co, Ltd (Lachin) (Tablo 1). Kondisyon sa yo tèmik monte bisiklèt yo te itilize: premye etap aktivasyon polymerase nan 94 ° C pou 2 min, Lè sa a, 40 sik nan 15 s chak nan 94 ° C pou denaturasyon modèl, rkwir pou 1 min nan 60 ° C, ekstansyon, ak fluoresans. Mezi yo te fèt pou 1 min nan 72 ° C. Tout echantiyon yo te anplifye twa fwa ak valè an mwayèn te itilize pou RT-QPCR analiz. Done anplifikasyon yo te analize lè l sèvi avèk FlexStation 3 (Molekilè Aparèy, Sunnyvale, CA, USA). IL-4, IL-17, ak IFN-γ ekspresyon jèn yo te normalized nan kontwòl la andojèn (ACTB). Nivo ekspresyon relatif nan mRNA sib yo te kalkile lè l sèvi avèk metòd la 2-ΔCT.
Te pwoteyin total ekstrè soti nan tisi lè l sèvi avèk yon omojèn tisi nan ripa lysis tanpon (ki gen yon pwoteyin ak fosfataz bwason inibitè) ak Lè sa a, santrifuje nan 13,000 rpm pou 20 min nan 4 ° C yo retire debri tisi. Senkant mikwogram nan pwoteyin yo te chaje pou chak liy, separe pa 10% SDS-PAJ, ak Lè sa a, transfere nan yon manbràn PVDF. Bloke te fèt nan 5% lèt sèk ki pa gra nan Tris-tampon sal (TBS) ki gen 0.1% Tween 20 pou 1 h nan tanperati chanm. Manbràn lan te enkubasyon ak lapen anti-Decorin primè antikò (dilye 1: 200; Boster, Wuhan, Lachin) (dilye 1: 200; Bioss, Beijing, Lachin) lannwit lan nan 4 ° C ak te reyaji nan dezyèm jou yo; Avèk segondè antikò (kabrit anti-lapen imunoglobulin G nan 1: 40,000 dilution) konbine avèk peroksidaz refor (Boster, Wuhan, Lachin) pou 1 èdtan nan tanperati chanm. Siyal Western blot yo te detekte avèk chemiluminescence ogmante sou manbràn nan chemiluminescent apre X-ray iradyasyon. Pou analiz densitometrik, transfèr yo te tcheke ak chiffres lè l sèvi avèk lojisyèl Bandscan ak rezilta yo te eksprime kòm rapò a nan sib iminoreactivite jèn nan iminoreactivite tubulin.
Kalkil estatistik yo te fè lè l sèvi avèk pake lojisyèl SPSS16.0 (SPSS, USA). Done yo kolekte pandan etid la yo te eksprime kòm mwayèn ± devyasyon estanda (vle di ± SD) ak analize lè l sèvi avèk yon sèl-fason repete mezi analiz de divèjans (ANOVA) detèmine diferans ki genyen ant de gwoup yo. P <0.05 te konsidere estatistik enpòtan.
Se konsa, etablisman an nan yon modèl bèt nan MC pa enplantasyon NPs otolog nan kò a vètebral ak fè obsèvasyon macroanatomik, analiz MRI, evalyasyon istolojik ak analiz molekilè byolojik ka vin yon zouti enpòtan pou evalye ak konprann fòmil yo nan MC imen ak devlope nouvo ki ka geri ou ka geri entèvansyon.
Ki jan yo site atik sa a: Han, C. et al. Yon modèl bèt nan chanjman modik te etabli pa enplantasyon otolog nwayo pulposus nan zo a subchondral nan kolòn vètebral la lonbèr. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/SREP35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., ak Boos, N. D 'sonorite mayetik nan kolòn vètebral la lonbè . to. Radyoloji 209, 661-666, doi: 10.1148/radyoloji.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, ak LeBoeuf-ED, K. Chanjman Modi ak relasyon yo nan rezilta klinik yo. Jounal Ewopeyen an: Piblikasyon Ofisyèl nan Sosyete a nan kolòn vètebral Ewopeyen an, Sosyete Ewopeyen an nan defo epinyè a, ak Sosyete Ewopeyen an pou rechèch kolòn vètebral nan kòl matris 15, 1312-1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Chanjman Modic nan endplates yo lonbèr vètebral: prévalence ak asosyasyon ak doulè nan do ki ba ak syatik nan mwayen-laj travayè gason. Kolòn vètebral 32, 1116-1122, doi: 10.1097/01.bs.0000261561.12944.ff (2007).
De Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., ak Dalinka, M. MRI nan chanjman mwèl zo tou pre plak la fen nan maladi dejeneratif nan kolòn vètebral la lonbèr. Ajr. American Journal of Radiology 149, 531-534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modik, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, ak Carter, JR maladi disk dejeneratif: Evalyasyon nan chanjman mwèl vètebral ak MRI. Radyoloji 166, 193-199, doi: 10.1148/radyoloji.166.1.3336678 (1988).
Modik, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, ak Carter, JR D 'nan maladi disk dejeneratif. Radyoloji 168, 177-186, doi: 10.1148/radyoloji.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Predictors nan chanjman siyal neovertebral (MODIC) chanjman nan popilasyon jeneral la. Jounal Ewopeyen an kolòn vètebral: Piblikasyon Ofisyèl nan Sosyete a Ewopeyen an kolòn vètebral, Sosyete Ewopeyen an nan defo epinyè, ak Sosyete Ewopeyen an pou rechèch kolòn vètebral nan kòl matris, Divizyon 19, 129-135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB ak Mannisch, K. Modic chanje apre èrnasyon disk lonbèr. Jounal Ewopeyen kolòn vètebral: Piblikasyon Ofisyèl nan Sosyete a nan kolòn vètebral Ewopeyen an, Sosyete Ewopeyen an nan defo epinyè ak Sosyete Ewopeyen an pou rechèch kolòn vètebral nan kòl matris 16, 977-982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronbad, M., ak Kaapa, E. Modik Kalite I Chanjman ka predi rapidman pwogresis koripsyon disk deformational: yon 1-ane etid potentiels. Ewopeyen an kolòn vètebral 21, 1135-1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ ak Fan, SW chanjman Modic: Kòz posib ak kontribisyon nan koripsyon disk lonbèr. Ipotèz medikal 73, 930-932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
KROK, HV Rupture disk entèn. Pwoblèm disk prolapse sou 50 ane. Kolòn vètebral (Phila PA 1976) 11, 650-653 (1986).
Post tan: Dec-13-2024